تیپهای آلودگی اغلب با علائم زیر تصحیح میشوند.
–= اندازه جوشها پایین تر از تیپ آلودگی.
++= بعضی از جوشها کوچکتر از حد معمول تیپ آلودگی هستند.
+= بعضی از جوشها بزرگتر از تیپ آلودگی هستند.
C = کلروز بیشتر از حد معمول تیپ آلودگی
N = نکروز بیشتر از حد معمول تیپ آلودگی
اقتباس از (Roelfs et al., 1992)
شکل 3-2) تیپهای آلودگی Puccinia triticinia بر روی لاینهای بک کراس رقم تاچر با یک ژن مقاوت به زنگ برگ. تیپهای آلودگی 0 تا 2 به عنوان مقاوم و تیپهای آلودگی 3 تا 4 به عنوان حساس در نظر گرفته شده اند (Roelfs et al., 1992).
3-4: آزمایشات میکروسکوپی
72 ساعت (سه روز) پس از مایه زنی گیاهچهها و قرار دادن آنها در شرایط مطلوب برای جوانه زنی اسپورها، از هر کدام از ارقام مایه زنی شده سه برگ را به عنوان نمونه برداشته و از هر کدام قطعاتی به طول پنج سانتیمتر جدا کرده و آنها را درون پتری دیش حاوی محلول رنگ بری (2 قسمت اتانول 95% و 1 قسمت اسید استیک) قرار داده به صورتی که محلول تمام سطح برگ را بپوشاند، پس از سه روز قطعات برگ را از محلول در آورده و به آرامی شستشو داده وباید مراقب بود که کنیدیومها از بین نروند سپس برگها را درون محلول حاوی 1 قسمت اتانول 95% و 2 قسمت لاکتوفنل (20 گرم فنل، 20سی سی آب، 20 سی سی اسید لاکتیک و 40 سی سی گلیسرول) قرار داده و در طول انتقال باید مراقبتهای لازم را انجام دهیم تا کنیدیها از بین نروند، پس از دو روز که قطعات برگ تقریبا شفاف شدند آنها را در محلول رنگ آمیزی (تریپان بلو 1% و لاکتوفنل) قرار داده و پس از دو روز قطعات رنگ آمیزی شده را بیرون آورده و بر روی لامهای شیشه ای قرار داده و با ریختن 2 قطره گلیسرول 50% بر روی آنها، آنها را فیکس کرده و سپس بر روی آنها لاملهای 50×22 میلی متری قرار داده و برای جلوگیری از تبخیر گلیسرول و نگهداری بیشتر اسلایدها دور آنها را لاک گرفته و در یخچال چهار درجه سانتیگراد نگهداری شدند. سپس اسلایدهای آماده شده را در زیر میکروسکوپ با بزرگنمایی 40X مشاهده نموده و تعداد اسپورهای جوانه زده و تعداد اسپورها در هرکدام از مراحل که در زیر طبقه بندی شده اند شمارش شدند.
جدول3-3 ساختمانهای تولید شده به وسیله قارچ پس از جوانه زنی بر اساس مشاهدات اولیه توسعه قارچی:
جوانه زده با لولههای جوانه تنها
Germinated with germ tube only
تشکیل لوپ اپرسوریوم
Formation of appressorial lobes
تشکیل شاخه های اپرسوریوم
Formation of appressorial branch
طویل شدن هیفهای ثانویه
Formation of elongating secondary hyphe
تشکیل پود میسلیوم
Formation of mycelia wet
(Ahmadi., 2001)
شکل 3-3: ساختمانهای تولید شده به وسیله قارچ بر روی گندم A) جوانه نزده B) جوانه زده با جوانه انتهایی D) تشکیل لوپ اپرسوریوم D) تشکیل شاخه های اپرسوریوم E) طویل شدن هیف های ثانویه
5-3 آزمایشات مزرعهای
ارقام گندم در مزرعه، در دو آزمایش مجزا (بدون استرس و تحت استرس بیماری زنگ) با فاصله 50 متر از هم به منظور جلوگیری از آلودگی گیاهان موجود در آزمایش بدون استرس، در قالب طرح بلوکهای کامل تصادفی با دو تکرار و فاصله بوتهها روی خطوط 15 سانتیمتر و فاصله خطوط از هم 25 سانتیمتر کشت شدند که هر ردیف به عنوان یک کرت در نظر گرفته شد.
3-5-1 آزمایش بدون استرس
ابتدا بذور درون گلدانهای کوچک کشت شده و در گلخانه نگهداری شدند و پس از اینکه دارای چند برگ شدند به زمین آماده شده (ابتدا زمین شخم و سپس دیسک و فارو زده شد) منتقل شدند و عملیات داشت شامل آبیاری، مبارزه با علفهای هرز ، مبارزه با آفات و … صورت گرفت.
3-5-2 آزمایش تحت استرس بیماری
در این آزمایش نیز مثل قبلی بذور درون گلدان کشت شدند و زمانیکه به ابتدای مرحله دو برگی رسیدند با اسپورهای زنگ قهوهای مایه زنی شدند و پس از تعیین تیپ آلودگی و مقاوم سازی یا آداپته کردن گیاهچهها به زمین منتقل شدند.
3-5-3 صفات اندازه گیری شده