(در فایل دانلودی نام نویسنده موجود است)
تکه هایی از متن پایان نامه به عنوان نمونه :
(ممکن است هنگام انتقال از فایل اصلی به داخل سایت بعضی متون به هم بریزد یا بعضی نمادها و اشکال درج نشود ولی در فایل دانلودی همه چیز مرتب و کامل است)
فهرست مطالب
عنوان صفحه
خلاصه فارسی………………………………………………………………………………………………………………………………………. 1
مقدمه …………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 3
فصل اول: کلیات
1-1 تعریف بیماری لیشمانیوز…………………………………………………………………………………………………………… 6
1-1-2 تاریخچه لیشمانیوز در جهان………………………………………………………………………………………………… 7
1-1-3 تاریخچه لیشمانیوز در ایران………………………………………………………………………………………………….. 8
1-2 ردهبندی و طبقهبندی انگل لیشمانیا………………………………………………………………………………………… 9
1-3 مورفولوژی و سیر تکاملی انگل لیشمانیا…………………………………………………………………………………… 11
1-3-1-1 مورفولوژی انگل………………………………………………………………………………………………………………… 11
1-3-1-2 شکل بی تاژک (آماستیگوت یا جسم لیشمن)………………………………………………………………. 11
1-3-1-3 شکل تاژک دار (پروماستیگوت)………………………………………………………………………………………. 12
1-3-2-1 سیر تکاملی انگل………………………………………………………………………………………………………………. 15
1-3-2-2 سیر تكاملی انگل در بدن حشره……………………………………………………………………………………… 15
1-3-2-3 پشه خاكی…………………………………………………………………………………………………………………………. 15
1-3-2-4 سیر تکاملی انگل در بدن میزبان مهره دار……………………………………………………………………… 16
1-4 راههای انتقال لیشمانیا به انسان………………………………………………………………………………………………. 18
1-4-1 انتقال از طریق نیش پشه خاکی………………………………………………………………………………………….. 19
1-4-2 انتقال مکانیکی……………………………………………………………………………………………………………………… 19
1-4-3 انتقال از راه خون…………………………………………………………………………………………………………………… 19
1-4-4 انتقال مستقیم……………………………………………………………………………………………………………………….. 19
1-5 بیماریزایی لیشمانیا…………………………………………………………………………………………………………………… 20
1-5-1 خصوصیات بیماری لیشمانیا…………………………………………………………………………………………………. 19
1-5-2 لیشمانیوز احشایی…………………………………………………………………………………………………………………. 20
1-5-3 لیشمانیوز جلدی پس از کالاآزار (PKDL)……………………………………………………………………… 21
1-5-3-1 لیشمانیوز جلدی و اشکال بالینی آن………………………………………………………………………………. 22
1-5-3-2 لیشمانیوز جلدی خشک…………………………………………………………………………………………………. 22
1-5-3-3 لیشمانیوز جلدی مرطوب… 22
1-5-3-4 لیشمانیوز جلدی مزمن (Chronic Cutaneous Leisniasihmas)………………… 23
1-5-3-4-1 شکل لوپوئید یا عود کننده سالک (Lupoid or Recidivan form)…………….. 24
1-5-3-5 لیشمانیوز جلدی- مخاطی……………………………………………………………………………………………… 24
1-6 ایمنولوژی عفونتهای لیشمانیا…………………………………………………………………………………………………. 25
1-6-1 مشخصات ایمنولوژیكی در لیشمانیوز پوستی……………………………………………………………………. 25
1-6-1-1 نقش آنتی بادی یا ایمنی همورال…………………………………………………………………………………… 25
1-6-1-2 نقش ایمنی سلولی در لیشمانیوز جلدی………………………………………………………………………… 26
1-6-1-3 عمل سلولهای نوتروفیل و ماكروفاژ در لیشمانیوز………………………………………………………….. 26
1-6-1-3 عملکرد T-CELL……………………………………………………………… 27
1-6-2 مشخصات ایمنولوژیكی در لیشمانیوز احشایی…………………………………………………………………… 28
1-6-2-1 نقش ایمنی همورال در كالاآزار………………………………………………………………………………………. 28
1-6-2-3 نقش ایمنی سلولی در كالاآزار………………………………………………………………………………………… 28
1-6-2-4 .نقش مهم سلول های CD+4……………………………………………………. 29
1-7 روشهای تشخیص و مطالعه 
لیشمانیوز…………………………………………………………………………………….. 30
1-7-1 روشهای مستقیم تشخیص انگل…………………………………………………………………………………………… 30
1-7-1-1 . جداسازی انگل از کناره ضایعات پوستی یا بافتهای آلوده…………………………………………… 31
1-7-1-1 رنگ آمیزی……………………………………………………………………………………………………………………….. 31
1-7-1-2 کشت انگل………………………………………………………………………………………………………………………… 32
1-7-2 روشهای ایمنولوژی در شناسایی انگل………………………………………………………………………………… 32
1-7-2-1 آزمایشات سرولوژی برای بررسی ایمنی همورال…………………………………………………………… 32
1-7-2-2 آزمایشات ایمنولوژیکی جهت بررسی ایمنی سلولی………………………………………………………. 33
1-7-2-2-1 تستهای پوستی……………………………………………………………………………………………………………. 33
1-7-2-3 ماهیت پاسخهای ازدیاد حساسیت تاخیری (DTH)……………………………………………………. 34
1-7-3 آزمون پوستی لیشمانین یا تست مونتنگرو…………………………………………………………………………. 35
1-7-3-1 معرف آنتیژنی لیشمانین برای تست پوستی………………………………………………………………… 35
1-7-4 تست سنجش تکثیر لنفوسیتی ymphocyte proliferation test(L.T.T) …………………….. 37
فصل دوم : مروری بر متون گذشته
فصل سوم: مواد و روشها
3-1کشت انگل……………………………………………………………………………………………………………………………………. 43
3 -1-1 مواد مورد نیاز جهت كشت انگل……………………………………………………………………………………….. 43
3-1-2. وسایل مورد نیاز جهت كشت انگل……………………………………………………………………………………… 43
3-1-3. طرز تهیه محیط كشت مایع RPMI- 1640………………………………………………………………….. 44
3-1-4. طرز تهیه محیط كشت كامل……………………………………………………………………………………………….. 44
3-1-5. طرز تهیه محیط كشت NNN……………………………………………………… 44
3-1-6. طرز تهیه (PBS) Phosphate Buffered Saline…………………………….. 45
3-1-7. روش كشت انگل…………………………………………………………………………………………………………………… 45
3-1-8. روش شمارش سلولها……………………………………………………………………………………………………………. 46
3-1-8-1. مواد و وسایل لازم جهت شمارش انگل…………………………………………………………………………. 46
3-1-8-2. شمارش با لام نئوبار………………………………………………………………………………………………………… 46
3-2. جداسازی انگلها با limiting dilution assay………………………………………. 47
3-2-1. مواد و وسایل مورد نیاز برای Limiting dilution assay……………………….. 48
3-2-2. مراحل Limiting dilution assay……………………………………………… 48
3-3. تهیه کرایو برای ذخیره در بانک سلولی…………………………………………………………………………………… 50
3-3-1. مواد و وسایل لازم جهت تهیه کرایو……………………………………………………………………………………. 50
3-4 تهیه آنتیژن Freeze – thaw از انگلها جهت درهم ریختگی غشاء و بروز تمامی آنتیژنها…………….. 52
3-5 الکتروفورز آنتیژنهای پروتئینی در ژل پلیآکریلآمید ( SDS-PAGE )………………………. 53
3-5-1 اصول الکتروفورز در ژل پلیآکریلآمید……………………………………………………………………………….. 53
3-5-2 سیستم بافری………………………………………………………………………………………………………………………… 54
3-5-3 مواد و وسایل مورد نیاز برای SDS-PAGE…………………………………………………………………… 54
3-5-4 آمادهسازی نمونه……………………………………………………………………………………………………………………. 57
3-5-6 طرز تهیه بافر الکترود……………………………………………………………………………………………………………. 57
3-5-7. روش انجام SDS-PAGE………………………………………………………… 58
3-5-8 روش رنگآمیزی با کوماسی آبی R- 250………………………………………….. 59
مواد مورد نیاز رنگآمیزی کوماسی آبی R- 250:…………………………………………………………………………… 59
3-6 سنجش میزان پروتئین تام با Bradford assay…………………………………….. 60
3-6-1 مواد و معرفهای مورد نیاز تست Bradford………………………………………. 60
3-6- 2 روش کار سنجش پروتئین تام……………………………………………………………………………………………. 61
3-7 تست Lymphocyte transformation test (L.T.T)………………………….. 62
3-7-1 روش انجام تست L.T.T……………………………………………………………. 63
1-3-7-1. مواد و وسایل لازم جهت انجام تست L.T.T…………………………………….. 64
3-8 ایمنیزایی در خوکچه هندی…………………………………………………………………………………………………….. 66
3-8-1 مواد و وسایل مورد نیاز ایمنیزایی در خوکچه هندی……………………………………………………….. 67
3-8-2 نحوه ایمنیزایی در خوکچه………………………………………………………………………………………………… 67
3-9 تزریق داخل پوستی آنتیژنها و سنجش میزانDTH…………………………………. 69
3-9-1 مواد و وسایل لازم برای تزریق داخل پوستی و سنجش میزان DTH……………….. 69
3-9-2 مراحل تزریق داخل پوستی………………………………………………………………………………………………… 69
3-9-3 نحوه سنجش میزان DTH………………………………………………………… 70
فصل چهارم: نتایج
4-1 کشت اولیه و جداسازی تک کلونها با روش limiting dilution…………………….. 72
4-2 بررسی پروفایل پروتئینی در آنالیز تک کلونها………………………………………………………………………. 72
4-3 نتایج میزان پروتئین تام آنتیژنها به روش Bradford……………………………….. 73
4-4 بررسی نتایج تست L.T.T…………………………………………………………….. 74
4-4-1 نتایج تست L.T.T در نمونه آنتیژن B……………………………………………. 74
4-4-2 نتایج تست L.T.T در نمونه آنتیژن C……………………………………………. 75
4-4-3. نتایج تست L.T.T در نمونه آنتیژن D…………………………………………… 76
4-4-4 نتایج تست L.T.T در نمونه آنتیژن لیشمانین استاندارد (M)…………………………………….. 76
4-4-5. بررسی نتایج حاصل از اندکس تحریکی تمامی آنتیژنها و میانگین آنها در مقایسه با Con-A 77
4-4-6 بررسی نتایج کلی L.T.T…………………………………………………………… 79
4-5 بررسی نتایج تستهای DTH بر روی خوکچههای هندی……………………………………………………. 79
4-5-1 نتایج تست DTH 24 ساعته……………………………………………………………………………………………. 79
4-5-2 نتایج تست DTH 48 ساعته…………………………………………………………………………………………….. 82
4-5-3 نتایج تست DTH 72 ساعته…………………………………………………………………………………………….. 83
فصل پنجم: بحث و پیشنهادات
منابع……………………………………………………………………………………………………………….. 95
خلاصه انگلیسی……………………………………………………………………………………………….. 106
فهرست اشکال و جداول و نمودارها
عنوان صفحه
شکل 1-1. اشکال مختلف انگل های لیشمانیا ………………………………………………………………………………… 11
شکل1-2. پروماستیگوت لیشمانیا (خارج سلولی) …………………………………………………………………………… 14
شکل -1-3. اشکال اماستیگوت و پروماستیگوت …………………………………………………………………………….. 15
شکل 1-4. پشه خاکی ………………………………………………………………………………………………………………………. 17
شکل1-5. چرخه زندگی لیشمانیا در میزبان مهره دار …………………………………………………………………… 18
شکل 1-6.. اشکال مختلف لیشمانیوز جلدی (سالک) ……………………………………………………………………. 24
شکل 1-7. بلعیده شدن پروماستیگوت لیشمانیا توسط یک سلول ماکروفاژی …………………………….. 28
شکل3-1. شکل شماتیک لام نئوبار …………………………………………………………………………………………………. 48
جدول3-1. جدول تهیه ژل جدا کننده پایین SDS-PAGE ………………………………………………….. 56
جدول3-1. جدول تهیه ژل جدا کننده بالا SDS-PAGE ……………………………….. 57
جدول3-1. جدول تنظیم رقت دستگاه spect ……………………………………………………………………………… 62
شکل 4-1. پروفایل پروتئینی باندهای حاصل از تککلونها در مقایسه با نمونه لیشمانین استاندارد…………. 74
جدول 4-1. نتایج حاصل از تست L.T.T در نمونه آنتیژنB ……………………………………………………. 75
جدول 4-2. نتایج حاصل از تست L.T.T در نمونه آنتیژن c……………………………………………………. 76
جدول 4-3. نتایج حاصل از تست L.T.T در نمونه آنتیژنی D……………………………… 77
جدول 4-4. نتایج حاصل از تست L.T.T در نمونه آنتیژنیM…………………………………………………… 78
جدول 4-5. مقایسه نتایج اندکس تحریکی به دست آمده در حضور نمونههای آنتیژنی تک کلونی
و Con-A…………………………………………………………………………………… 79
نمودار1-4. نتایج میانگین اندکس تحریکی هر یک از تک کلونها در تست L.T.T………….. 80
جدول4-6. میانگین تستهای DTH ،24 ساعته………………………………………………………………………… 81
نمودار 2-4. بررسی نتایج تستهای داخل پوستی پس از 24 ساعت ………………………………………. 81
جدول4-7. میانگین تستهای DTH ، 48 ساعته ……………………………………………………………………….. 82
نمودار 4-3. بررسی نتایج تستهای داخل پوستی پس از 48 ساعت ………………………………………. 82
جدول4-8. میانگین تستهای DTH ،72ساعته ………………………………………………………………………… 83
نمودار 4-4. بررسی نتایج تستهای داخل پوستی پس از 72 ساعت …………………………………………. 83
خلاصه فارسی
مقدمه: لیشمانیا ماژور یک انگل پاتوژن پروتوزوأ داخل سلولی است که عامل طیف وسیعی از عفونتهای پوستی با پیامدهای بالینی متنوع، از یک زخم پوستی خود بهبود شونده تا زخمهای گسترش یافته غیر بهبود شونده میباشد. ایمنی سلولی نقش مهمی در مقاومت در برابر لیشمانیا ماژور بازی میکند. واکنشهای حساسیت شدید دیررس که با تستهای پوستی لیشمانین تشخیص داده میشوند یک روش تشخیصی برای سنجش ایمنی سلولی است و بطور وسیع برای سنجش اپیدمیولوژیکی افراد در معرض آنتیژنهای لیشمانیایی، سنجش واکسنهای کاندید و در کمک به تشخیص، مورد استفاده است. تست پوستی لیشمانین پبطور عمومی به نام تست مونتنگرو یا تست لیشمانین شناخته میشود، که نیازمند یک آنتیژن استاندارد خالص و هموژن میباشد.
هدف: تهیه و سنجش تککلونهای جداشده از لیشمانیا ماژور برای تست پوستی
روش: جداسازی تککلونها از سوش لیشمانیا ماژور مرجع (MRHO/IR/75/ER) به روش رقت دهی محدود شونده انجام گرفت. کلونهای جداشده با استفاده از روشهای برونتنی، SDS-PAGE و تست تکثیر لنفوسیتی با استفاده از سلولهای تکهستهای خون محیطی افراد بهبود یافته از عفونت لیشمانیا ماژور مورد ارزیابی قرار گرفتند. توانایی هر تککلون جداشده با تست پوستی چهار خوکچه هندی ایمن شده دربرابر لیشمانیا ماژور مورد سنجش قرار گرفته شدند. تککلونهای جداشده بههمراه لیشمانین در ناحیه اصلاح شده شکمی حیوانها بطور داخل پوستی تزریق شدند.
